northern印迹杂交的简介

Northern印迹杂交的RNA吸印与Southern印迹杂交的DNA吸印方法类似,只是在上样前用甲基氢氧化银、乙二醛或甲醛使RNA变性,而不用NaOH,因为它会水解RNA的2'-羟基基团。RNA变性后有利于在转印过程中与硝酸纤维素膜结合,它同样可在高盐中进行转印,但在烘烤前与膜结合得并不牢固,所以在转印后用低盐缓冲液洗脱,否则RNA会被洗脱。在胶中不能加EB,因为它会影响RNA与硝酸纤维素膜的结合。为测定片段大小,可在同一块胶上加分子量标记物一同电泳,之后将标记物切下、上色、照相,样品胶则进行Northern转印。标记物胶上色的方法是在暗室中将其浸在含5μg/ml EB的0.1mol/L醋酸铵中10min,光在水中就可脱色,在紫外光下用一次成像相机拍照时,上色的RNA胶要尽可能少接触紫外光,若接触太多或在白炽灯下暴露过久,会使RNA信号降低。
琼脂糖凝胶中分离功能完整的mRNA时,甲基氢氧化银是一种强力、可逆变性剂,但是有毒,因而许多人喜用甲醛作为变性剂。所有操作均应避免RNase的污染。
原理:
整合到植物染色体上的外源基因如果能正常表达,则转化植株细胞内有其转录产物——特异mRNA的生成。将提取的植物总RNA或mRNA用变性凝胶电泳分离,则不同的RNA分子将按分子质量大小依次排布在凝胶上;将他们原位转移到固定膜上;在适宜的离子强度及温度条件下,用探针与膜杂交;然后通过探针的标记性质检测出杂交体。若经杂交,样品无杂交带出现,表明外源基因已经整合到植物细胞染色体上,但在该取材部位及生理状态下该基因并未有效表达。



northern杂交和southern杂交的区别~

Northern印迹杂交(Northern blot)。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创建,称为Southern印迹技术,RNA印迹技术正好与DNA相对应,故被称为Northern印迹杂交,与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot。
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。
简言之,一个RNA;一个DNA

相同的是 他们都是分子杂交
不同的是
dna的杂交技术——southern印迹杂交
rna的杂交技术——northern印迹杂交
蛋白质的杂交技术——western印迹杂交

  • northern印迹杂交简介
    Northern印迹杂交是一种RNA检测技术,其基本原理与Southern印迹杂交中的DNA吸印相似。主要区别在于RNA处理步骤,Northern印迹前,使用甲基氢氧化银、乙二醛或甲醛对RNA进行变性,而非NaOH,因为NaOH会破坏RNA的2'-羟基基团。这样处理后的RNA更易于在转印过程中与硝酸纤维素膜结合。通常在高盐条件下进行转印,...

  • Northern印迹杂交(Northern blot hybridization)
    【答案】:指将RNA变性及电泳分离后,将其转移到固相支持物上,再与其互补的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定RNA分子的的量与大小。因该技术与DNA印迹技术相对应,故被称为Northern印迹杂交。

  • northern杂交和southern杂交的区别
    Northern印迹杂交是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创建,称为Southern印迹技术,RNA印迹技术正好与DNA相对应,故被称为Northern印迹杂交,与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利...

  • Northern的杂交有哪些过程?
    Northern杂交的总体过程与Southern杂交相似,只不过在印迹(Blotting)过程中转移的是RNA而不是DNA,这种将RNA样品从凝胶转移滤膜的方法,其设计者为之起了一个与Southern:blotting对应的名称Northern:blotting。其分子杂交过程与Southern分子杂交方式是相同的。Northern杂交主要用来检测细胞或组织样品中是否存在与...

  • northern杂交的基本原理 流程和主要目的分别是什么 基因工程复习_百度...
    ①Southern印迹杂交:用于分析DNA,包括两个主要过程:一是印迹,即将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上;二是退火,与固定于膜上的同位素标记的探针进行分子杂交,并进行显影观察,这样即可查找所需DNA的位点.②Northern印迹杂交:将RNA从琼脂糖凝胶中转印到...

  • northern印迹杂交的简介
    Northern印迹杂交的RNA吸印与Southern印迹杂交的DNA吸印方法类似,只是在上样前用甲基氢氧化银、乙二醛或甲醛使RNA变性,而不用NaOH,因为它会水解RNA的2'-羟基基团。RNA变性后有利于在转印过程中与硝酸纤维素膜结合,它同样可在高盐中进行转印,但在烘烤前与膜结合得并不牢固,所以在转印后用低盐缓冲...

  • 印迹杂交的方式简介
    Northern印迹杂交(Northern blot)。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创建,称为Southern印迹技术,RNA印迹技术正好与DNA相对应,故被称为Northern印迹杂交,与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot。Northern印迹杂交由Southerm印杂交法演变...

  • northern印迹杂交RNA甲醛凝胶电泳和吸印方法
    在进行Northern印迹杂交实验时,你需要准备一系列的试剂,包括10×MSE缓冲液(含有MOPS、醋酸钠和EDTAPH8.0)、5×载样缓冲液(甘油、EDTA和溴酚蓝)、37%甲醛(需在通风柜中配制)、20×SSC、去离子甲酰胺、50mmol\/LNaOH(含10 mmol\/L NaCl)以及0.1mol\/LTris,pH7.5。实验步骤如下:在40ml...

  • 印迹杂交Northern印迹的制备
    以下是北方印迹杂交的详细制备步骤:1. 准备总RNA(10-20μg), 用含有甲酰胺、Northern印迹杂交10×MOPS缓冲液和甲醛溶液的溶液在65℃水浴中温育5分钟,然后迅速冷却,加入上样缓冲液,置于配制好的甲醛\/琼脂糖凝胶中。进行电泳时,需在通风橱内操作,带上手套,使用专用的RNA电泳槽。2. 在电泳过程中...

  • northern印迹杂交 发明人及其发明时间?
    发明人 1975年,Southern印迹杂交(Southern blot)由英国人埃德温·迈勒·萨瑟恩 (Edwin Mellor Southern)创建。