如何从基因文库中找到所需要的基因

从基因文库中找到目的基因是一件比较复杂的事情,要根据目的基因已有的某些信息来进行。下面介绍一种根据基因的部分核苷酸序列找到目的基因的方法。
  第一步,通过PCR方法将目的基因已知的部分核苷酸序列扩增出来,进行放射性同位素标记(也可以用别的标记方法进行,如生物素、荧光素等),即用标记了放射性同位素的目的DNA片段作为探针,与扩增出来的DNA杂交。
  第二步,将基因文库中的所有菌落转移至硝酸纤维膜上(也可以用其他类型的膜),然后,通过处理溶解消化掉细菌中的蛋白质,并使DNA固定在膜上。
  第三步,按Southern杂交的方法进行杂交。
  第四步,在X光底片上出现黑斑的菌落,这表明这个菌落中含有所需要的目的基因(若选用别的标记方法,有阳性信号的菌落则含有所需要的目的基因)。
  第五步,从该菌落中再提取目的基因。

怎样从基因文库中找出目的基因~

如何从基因文库中获取目的基因

从基因文库中筛选某一克隆的常用办法是分子杂交。首先把属于一个文库的细菌或噬菌体以较低密度接种在培养皿上以取得相当分散的菌落或噬菌斑,然后用硝酸纤维滤膜吸印,使培养皿和滤膜的相对应的位置上具有相同的克隆。同时另行制备供分子杂交用的探针。为了筛选真核生物的某种基因,常从它的转录产物mRNA经反向转录(见中心法则)合成相应的互补 DNA(cDNA),再加入用32P标记的核苷三磷酸,用DNA多聚酶I切口移位方法制成有同位素标记的探针。把探针 DNA和硝酸纤维滤膜上的菌落或噬菌体分别进行变性处理,然后进行分子杂交。再将 X光底片覆盖在经过处理的滤膜上以进行放射自显影。在培养皿上找出和 X光底片上的黑点相对应的菌落或噬菌斑,这些菌落或噬菌体中便包含着所需要的基因。

  • 如何从基因文库中找到所需要的基因?
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    第一步,通过PCR方法将目的基因已知的部分核苷酸序列扩增出来,进行放射性同位素标记(也可以用别的标记方法进行,如生物素、荧光素等),即用标记了放射性同位素的目的DNA片段作为探针,与扩增出来的DNA杂交。第二步,将基因文库中的所有菌落转移至硝酸纤维膜上(也可以用其他类型的膜),然后,通过处理溶...

  • 从基因文库中获取目的基因的根据是
    1、杂交筛选,对目的基因序列有所了解,制备核酸探针筛选目的cDNA 对应选项A 2.功能结合法筛选目的cDNA。目的cDNA克隆可以通过表达产物的其他结合功能分离筛选。如:钙调蛋白在钙离子存在下可以与多种酶形成复合物,可作为探针; 对应选项B 3、差示筛选法。对应选项C 所以答案选D ...

  • 如何从基因文库中获取目的基因?
    获得目的基因的方法:一、构建基因文库 提取总DNA。用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆(gene clone)将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库(gene library)。二、...

  • 从基因文库中获取目的基因的根据是
    根据就是基因文库是对某一物种基因组进行覆盖而构建的文库,文库一定包含所需的目的基因。方法是:1.从供体中制备高纯度的染色体基因组DNA;2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段;3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养;5.观察培养...

  • 如何从基因文库中筛选出目的基因
    如何从基因文库中获取目的基因

  • 基因文库法如何获取目的基因
    基因工程流程的第一步就是获得目的DNA片段,如何获得目的DNA片段就成为基因工程的关键问题.所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因.常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选 直接获取 1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的...

  • 如何从基因文库中获取目的基因不需要模板
    从基因文库中筛选某一克隆的常用办法是分子杂交.首先把属于一个文库的细菌或噬菌体以较低密度接种在培养皿上以取得相当分散的菌落或噬菌斑,然后用硝酸纤维滤膜吸印,使培养皿和滤膜的相对应的位置上具有相同的克隆.同时另行制备供分子杂交用的探针.为了筛选真核生物的某种基因,常从它的转录产物mRNA经反向...

  • 怎样从基因文库中找出目的基因
    获取目的基因的方法是:1从基因文库中获得。目的基因片段的获取:目的基因的组成:一个能转录翻译的结构基因应包括转录启动区、核糖体识别区、编码区、和转录终止区。获得途径:1限制性内切酶酶切法2利用PCR技术直接扩增目的基因3目的基因的化学合成4通过构建基因组文库或CDNA文库分离目的基因5反向转录法分离...

  • 如何提取目的基因?
    1.从基因文库中获取目的基因(俗称:鸟枪法):将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌 的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因 在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达...