Southern杂交鉴定方法主要有哪些?

1)取10ul待测DNA,于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,)
2) 凝胶用溴化乙锭染色,切掉凝胶四周多余部分,并在凝胶的一角作一记号, 拍照
记录电泳结果(拍照时, 凝胶旁放一尺子)。
3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)
A. 将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15min,使DNA脱嘌呤。
B.用蒸馏水短暂洗凝胶2次。
C.将凝胶浸没入30mL变性液中30min, 使凝胶变性。
D.将凝胶浸没入30mL中和液中15min使它被中和。
重复D一次。在制备杂交用胶时准备转移的平台、膜、滤纸等(4、5)。
4) 准备DNA从凝胶向膜转移的平台
5) 将1张待用尼龙膜和3张厚滤纸切成与待转移胶相同大小,并在尼龙膜一角做一标记。另1张厚滤纸切成与凝胶相同宽度,长度(约18cm)足以达到转移液盒子的底部。准备10 X SSC 转移液。
将待用尼龙膜用蒸馏水浸湿后,再浸入10 X SSC 转移液中。
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我现在研究生刚毕业,我使用的是地高辛法杂交。我估计我们可能是同行,不知道你学的是什么专业?建议你把Northern杂交和蛋白印迹杂交也好好的学习一下,俗话说技多不压身吧!

Southern的杂交有哪些过程?~

凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段,将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上,经干烤固定,再与相对应结构的已标记的探针进行杂交反应,用放射性自显影或酶反应显色,检测特定大小分子的含量。
Southern杂交主要用于检测外源基因是否插入植物基因组(比PCR可靠)以及外源基因插入的拷贝数。

怎么
感觉像是考试题目。。。
A:
southern杂交带的强弱是序列相似性差异的表现,强的带应该和你探针序列的相似性很高,相似性差的自然就很弱
B:这个很容易解释,southern杂交检验的是dna水平,act3可能是一个假基因,功能已经丧失了,不表达了,所以你根本检测不到。

  • 核酸杂交技术(Southern Blot、Northern Blot)
    核酸杂交技术,如Southern Blot和Northern Blot,是生物学研究中常用的基因检测手段。Southern Blot主要针对DNA,通过琼脂糖凝胶电泳分离DNA分子,通过变性、转移至膜上并与标记的探针进行杂交,检测特定基因是否存在突变或重排。Northern Blot则针对RNA,同样通过电泳分离RNA分子,然后转移到膜上,用RNA探针对...

  • southern杂交的应用
    Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。可用于检测样品中的DNA及其含量,了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。主要应用于1.遗传病诊断 2.DNA图谱分析 3.PCR产物分析。例如在研究转基因的时候,可用于检测外源基因的插入和整合情况。

  • Southern blot是检测什么的??
    然后通过紫外交联或者120℃烘烤30分钟的方法将核酸固定。然后用核酸探针去杂交这张膜。然后杂交完毕后就是显色的步骤了(根据探针上面标记的不同有放射自显影、底物显色、化学发光等)。中间稍微省略了一些细节,具体每一步操作你要看说明书。那么southern究竟可以用来干什么呢?稍微总结了三点:1、限制性...

  • 利用Southern怎么测定基因拷贝
    其原理是将待测的 DNA 样品固定在固相载体(硝酸纤维膜或尼龙膜)上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相 DNA 的位置上显示出杂交信号,通过检测信号的有无、强弱可以对样品定性、定量,从而计算出转入的拷贝数。Southern法准确性高、特异性强,但存在费时费力的缺点。另外,由于Southern...

  • southern印迹杂交基本方法及主要步骤
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  • 简明扼要讲一下Southern blotting,PCR,原位杂交
    Southern blotting:印迹(Blotting)通常是指通过吸附或电泳方法将经凝胶电泳分离的大分子物质从胶上转移到固相载体上,再与特定的探针反应从而达到检测或鉴定这些大分子物质的过程。Southern于1975年首先建立从琼脂糖凝胶电泳中分离的DNA转至纤维膜上,再与特定的带有放射性同位素标记的DNA(或RNA)片断杂交,...

  • DNA印迹(Southern blotting)
    【答案】:是指将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相支持物上,此称为印迹,然后通过与标记的单链DNA或RNA探针的杂交作用检测这些被转移的DNA片段,这种实验方法称Southern印迹杂交。

  • Southern杂交一般过程及影响杂交因素。
    南方杂交,一种DNA分子操作技术,其核心步骤涉及几个关键环节。首先,通过限制性内切酶切割DNA,然后通过凝胶电泳分离出不同的片段。紧接着,这些片段通过转膜技术转移到硝酸纤维素或尼龙膜上。为了排除非特异性结合,预杂交步骤至关重要,它会封闭滤膜上的非目标位点。在这一过程中,探针的运用至关重要,...

  • 印迹杂交方法介绍
    印迹杂交技术,包括Northern和Southern两种形式,是RNA和DNA分析中常用的实验手段。与Southern印迹相似,Northern印迹的准备步骤中,RNA先通过甲基氢氧化银、乙二醛或甲醛变性,而非NaOH,因为NaOH会水解RNA的2'-羟基基团。变性后的RNA更易在硝酸纤维素膜上吸附,但需在高盐条件下进行转印,转印后需用低盐...

  • southern印迹杂交结果注意
    在进行Southern印迹杂交实验时,观察到阳性反应呈现出明显的带状分布。转膜过程至关重要,确保DNA完全转移到膜上是必不可少的步骤。杂交条件和漂洗步骤对于获得清晰的阳性结果以及良好的背景对比至关重要。如果漂洗不彻底,可能会导致背景信号过强;相反,过度漂洗则可能掩盖真正的阳性信号,造成假阴性结果。在...